PDF 【目的】赤霉素3-氧化酶（gibberellin3-oxidases，GA3ox）是赤霉素（GAs）生物合成途径中关键酶之一，对山核桃（Caryacathayensis）中CcGA3ox基因进行克隆，并进行序列分析和功能验证。【方法】以山核桃体细胞胚为材料，提取RNA，采用PCR扩增技术，克隆山核桃CcGA3ox基因编码区全长；对序列进行生物信息学分析。为验证基因功能，通过同源重组技术构建具有强启动子的35S::CcGA3ox::GFP过表达载体，以核桃体细胞胚为转化材料，利用农杆菌介导法进行遗传转化；利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析山核桃CcGA3ox基因在转基因阳性核桃植株中的相对表达量。采用紫外分光光度计检测植株中叶绿素含量，并分析其差异。【结果】山核桃CcGA3ox基因开放阅读框（ORF）全长为1116bp，编码371个氨基酸。对CcGA3ox氨基酸序列分析发现，其含有2OG-FeⅡ-Oxy结构域。系统进化树显示，CcGA3ox与薄壳山核桃CiGA3ox亲缘关系最近，与核桃JrGA3ox亲缘关系较近。对核桃体细胞胚进行遗传转化、荧光检测及PCR验证表明，35S::CcGA3ox::GFP过表达载体被成功转入核桃体胚中。核桃阳性再生植株与对照植株相比，株高明显增高；qRT-PCR结果表明，CcGA3ox基因相对表达量显著增加。同时，过表达CcGA3ox基因可以降低核桃阳性再生植株中叶绿素含量。【结论】山核桃CcGA3ox基因在核桃生长过程中对株高调控起关键作用。