miR171家族成员分子特性及miR171b调控靶标在龙眼体胚发生早期的表达分析

摘要：【目的】研究龙眼miR171家族的分子特性及miR171b调控靶标对GA3、2, 4-D的响应和在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】通过龙眼基因组和转录组数据库筛选得到龙眼miR171成熟体与前体序列,基于邻近法 (neighborjoining, NJ) 利用MEGA 7.0以及iTOL进行系统发育树的构建以及序列多重比较分析;psRNAtarget预测龙眼miR171家族靶基因, 利用改良的RLM-RACE验证靶基因裂解位点;利用qPCR分析不同浓度2, 4-D、GA3处理的龙眼胚性愈伤组织 (EC) 及龙眼体胚发生早期miR171b与其靶基因SCL6 (Scarecrow-like) 的表达模式。【结果】分子特性分析提示, 龙眼miR171各成员之间的进化关系较远, 进化来源复杂, 进化速率具有差异性;靶基因预测显示miR171家族靶基因主要包括SCL6、SCL15、SCL27、转录剪切体X2和RNA依赖的RNA聚合酶1等;裂解位点验证表明miR171b可以靶向切割SCL6, 同时SCL27具有结合位点之外的切割位点。在不同浓度2, 4-D和GA3处理下, miR171b与SCL6的表达趋势基本呈现为负调控模式;随着2, 4-D浓度的升高, miR171b的转录水平总体呈下调趋势, SCL6的表达量总体呈上调趋势;GA3的存在显著下调miR171b的转录水平, 而SCL6的表达量分别在2.5和12.5 mg·L-1GA3时达到最高值和最低值。龙眼早期体胚发生前期 (0～6 d) , miR171b与SCL6表达模式相似, 龙眼早期体胚发生后期 (6～12 d) , miR171b显著下调, SCL6显著上调, 提示大量积累的SCL6对龙眼球形胚 (GE) 形态建成具有重要作用, 而miR171b通过减少转录产物的积累促进SCL6表达。【结论】miR171具有物种间的保守性以及成员间的差异性, 同时miR171b及其靶标SCL6通过响应激素调节龙眼早期体胚发生的形态建成。