‘红肉蜜柚’ CmMYB330 基因的分离与表达分析

摘要：【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式，探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制，为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材，参考甜橙MYB全基因组分析，利用生物信息学分析和PCR技术克隆CmMYB330 的编码区序列及其5’端调控序列，并对序列进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术对CmMYB330 在‘红肉蜜柚’果实汁胞不同发育时期和不同部位的表达情况进行分析。利用农杆菌介导法将CmMYB330 与GFP 的融合表达载体注射转化到烟草叶片中进行亚细胞定位分析。利用酵母双杂交系统对CmMYB330 进行转录激活活性分析。【结果】CmMYB330 的编码区序列长度为942 bp，编码313 个氨基酸，预测为核定位蛋白，为典型的R2R3 MYB 转录因子。CmMYB330 与甜橙Cs1g19400.1、AmMYB330 等亲缘关系近，都属于R2R3 MYB第4亚组。CmMYB330 的5’端调控序列为起始密码子上游-1 748 bp序列，预测该序列含有TATA-box、CAAT-box 2个启动子核心元件，3个MBS，1个AC-I，1个5UTR Py-richstretch，还有大量激素（如赤霉素、乙烯、水杨酸等）响应元件。CmMYB330 表达量在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中有起伏，但总体呈现上升趋势，表达量在花后208 d达到最大，之后开始下降。在转化p-super1300-CmMYB330-GFP 的烟草叶片细胞核中检测到绿色荧光信号，与预测结果一致，说明CmMYB330定位在细胞核中。在Y2H Gold酵母中，CmMYB330表现为没有转录激活活性。【结论】克隆了‘红肉蜜柚’MYB转录因子CmMYB330 编码区序列及其5’端调控序列，CmMYB330属于R2R3 MYB第4亚组，与汁胞粒化相关，为核定位蛋白，同时分析了其在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中的表达水平，总体呈上升趋势。为进一步研究CmMYB330 与蜜柚汁胞粒化的关系奠定了基础。