【目的】自噬在植物抵抗逆境胁迫过程中起重要作用。探究关键自噬基因PbATG5调控梨抗旱性的功能与作用机制,为利用基因工程对梨进行抗旱遗传改良提供理论依据。【方法】以杜梨(PyrusbetulifoliaBunge)为试验材料克隆得到梨自噬基因PbATG5,对其进行序列分析、亚细胞定位及启动子顺式作用元件分析,利用实时荧光定量PCR技术分析其在脱水处理下的表达模式。利用花序浸蘸法和病毒诱导的基因沉默技术分别获得异源过表达PbATG5的拟南芥植株和PbATG5瞬时沉默的杜梨植株,进行干旱表型分析,并从膜系统损伤、抗氧化能力、自噬活性等角度探究PbATG5对植株抗旱性的影响。【结果】PbATG5的开放阅读框全长1110bp,编码370个氨基酸,具有保守的APG5结构域,定位于细胞膜和细胞核,启动子区存在众多与干旱响应相关的顺式作用元件,且可受脱水胁迫诱导表达。干旱胁迫下,异源过表达PbATG5的拟南芥植株相对含水量、叶绿素含量均显著高于野生型,活性氧含量、相对电导率及丙二醛含量则相对较低。在杜梨中瞬时沉默PbATG5明显降低了植株的抗旱性,干旱下沉默植株中叶片相对含水量、叶绿素含量显著低于对照植株,相对电导率与丙二醛含量则显著高于对照植株。此外,干旱胁迫下,PbATG5沉默杜梨植株抗氧化能力和自噬活性均显著低于对照植株。【结论】梨自噬基因PbATG5正调控植株的抗旱性,可作为梨抗旱分子育种的基因资源。



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