褪黑素在霞多丽葡萄种子体细胞胚诱导发生中的作用

【目的】探究褪黑素在酿酒葡萄种子体细胞胚发生及循环诱导中的作用，建立以种子为外植体的体细胞胚诱导体系，为缩短葡萄属植物体胚诱导周期提供依据。【方法】以花后60、70、80d的欧洲酿酒葡萄品种霞多丽、马瑟兰与美乐种子为外植体，研究不同切种和放置方法下，5种不同质量浓度（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg·L-1）褪黑素对其初生子叶胚萌发及二次胚循环诱的作用。【结果】花后80d种子诱导率为18.33%，明显高于70d和60d，采用纵切法正放接种外植体30d时，初生子叶胚萌发率达到最高，为33.07%，纵切倒放、横切正放和横切倒放的萌发率依次降低，为10.98%、5.71%和3.24%。褪黑素诱导3个酿酒葡萄品种萌发初生子叶胚的作用均强于2，4-D，其中，霞多丽种子在MS+0.6mg·L-1褪黑素+2.0mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+3g·L-1植物凝胶+0.5g·L-1活性炭的培养基诱导30d时，其初生子叶胚诱导率最高，为18.33%。利用霞多丽初生子叶胚切段循环诱导二次体细胞胚60d时，开始出现二次体细胞胚，进一步诱导形成球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚。诱导至90d时，在添加0.6mg·L-1褪黑素的培养基上诱导率最高，为14.40%，0.4mg·L-1次之，为3.13%，0.2mg·L-1诱导率为1.89%，而0.8、1.0mg·L-1褪黑素培养基和2，4-D诱导下无次生胚的形成。【结论】种子成熟度与初生子叶胚的萌发率呈正相关；种子纵切正放接种有利于初生子叶胚萌发；低质量浓度褪黑素对霞多丽种子萌发初生子叶胚及二次胚发生具有缩短诱导时间的作用。