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葡萄CHS基因家族鉴定与表达分析

发布日期:2023/8/7 15:55:24 浏览次数:
作者:成永娟,张明月,曹雪璟,毛娟,陈佰鸿
关键词:葡萄;查尔酮合酶;生物信息学;qRT-PCR;基因克隆
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20220460
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摘 要:【目的】明确葡萄查尔酮合成酶(chalcone synthaseCHS)基因家族响应外源激素和非生物胁迫的表达模式。 【方法】利用生物信息学方法对葡萄CHS基因家族成员进行理化性质、系统进化、共线性、顺式作用元件等分析。采用 实时荧光定量PCRquantitative real-time PCRqRT-PCR)检测VvCHS基因在外源激素和非生物胁迫下的表达情况,将 筛选出的VvCHS3基因构建植物表达载体并进行烟草瞬时转化以确定其表达位置。结果】在葡萄基因组中共鉴定出7 VvCHS基因成员,分布于5条不同的染色体上,蛋白质二级结构以α-螺旋和不规则卷曲为主。系统进化和基因对选 择压表明,CHS基因家族基因可分为三大亚族,葡萄CHS基因家族与其他物种之间主要进行纯化选择。共线性分析 表明,VvCHS3VvCHS4VvCHS3VvCHS5VvCHS4VvCHS5之间存在共线性关系。顺式作用元件预测结果表 明,大部分VvCHS基因成员可能同时对多种逆境胁迫有响应。qRT-PCR分析发现,VvCHS基因具有明显的组织特异 性,在根中表达水平最高,茎中表达水平最低。在5 mmol·L-1 水杨酸(salicylic acidSA)处理下,VvCHS3基因在茎中的 表达水平显著高于对照,为对照的44.3倍,在0.1 mmol·L-1 茉莉酸甲酯(methyl jasmonateMeJA)处理下,VvCHS3基因 在叶中显著上调表达,为对照的36.1倍。在400 mmol·L-1 NaCl处理下,VvCHS5基因在根中相对表达量高于对照,为 对照的30.6倍。在4 ℃10%聚乙二醇(polyethylene glycolPEG)处理下,VvCHS4基因在根中显著上调表达。成功 克隆得到VvCHS3基因,经农杆菌介导瞬时转化烟草下表皮细胞,荧光倒置显微镜检测表明VvCHS3基因定位于细胞 核和细胞膜,与预测结果相符。【结论】葡萄CHS基因家族参与SAMeJA等外源激素的调控,同时响应低温、干旱和 高盐胁迫。

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