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7个苹果KNOX转录因子基因克隆、 表达和蛋白互作分析

发布日期:2023/8/7 15:52:52 浏览次数:
作者:卢苗,李佩 ,荣钰莹,张梦涵,贾鹏,栾好安,齐国辉,张雪梅,董庆龙
关键词:苹果;KNOX转录因子;基因克隆;表达分析;蛋白互作
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20220583
全文: PDF 摘要全文阅读

摘 要:目的KNOTTED1 like homeoboxKNOX)蛋白在植物生长发育等多个生物学过程中发挥着重要作用。以紫弘富士为材料,分离了多个苹果(Malus domesticaKONX基因,研究其结构域、进化分析、组织表达、非生物胁迫响应及其与MdOFP相互作用情况。【方法】使用RT-PCR技术克隆获得7MdKNOX基因并进行生物信息学分析。利用Array技术检测MdKNOX基因在苹果不同组织中的表达模式。使用RT-qPCR技术检测MdKNOX基因在盐胁迫和渗透胁迫下的表达模式。通过Y2H实验检测了MdKNOX蛋白与MdOFP蛋白的互作情况。【结果】测序结果表明,获得 了7KNOX 转录因子cDNAMdKNOX1MdKNOX2MdKNOX5MdKNOX10MdKNOX13MdKNOX16 MdKNOX22GenBank登录号:MG021644~MG021650)。结构域分析表明,获得的7MdKNOX蛋白序列均含有MEINOXHDELK结构域。进化分析表明,MdKNOX1MdKNOX2MdKNOX5属于KNOX Ⅱ亚组;MdKNOX10MdKNOX13MdKNOX16MdKNOX22属于KNOXⅠ亚组。启动子顺式作用元件分析结果表明,7MdKNOX基因启动子上包含多个顺式作用元件。Array分析结果显示,MdKNOX基因具有不同的组织表达模式。实时荧光定量PCR分析结果表明,盐胁迫处理下,MdKNOX13的相对表达水平上调,而MdKNOX1MdKNOX2MdKNOX5的相对 表达水平下调;渗透胁迫处理下,MdKNOX2 的转录水平下调。酵母双杂交结果显示,MdKNOX1/22 蛋白能与MdOFP6蛋白相互作用,MdKNOX5蛋白能与多个MdOFP蛋白相互作用,且MdKNOX5蛋白与MdOFP蛋白相互作用,HD区域是互作必需的。【结论】这些结果为苹果KNOX转录因子在生长、发育和逆境下生物学功能的解析、调控网络的构建提供了强有力的理论基础和参考。

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