- 作者:焦楠,朱宁,程春振,林玉玲,李汉生,陈发兴,赖钟雄
- 关键词:西番莲;夜来香花叶病毒;黄瓜花叶病毒;病毒检测;双重RT-PCR技术
- DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20190012
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摘要:【目的】建立西番莲夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus, TeMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)的双重RT-PCR检测体系。【方法】根据TeMV和CMV的外壳蛋白(coat protein, CP)基因序列,分别设计两对特 异性引物,并对引物组合浓度、退火温度和循环次数进行优化。【结果】优化结果显示:TeMV和CMV最佳引物组合浓度分别为2.0 mmol·L-1 和8.0 mmol·L-1;最佳退火温度为57 ℃;最佳循环次数为35次。【结论】灵敏度分析结果显示,在 样品cDNA原液稀释到10-5 时,仍能检测到两种病毒扩增出的目的条带。同时,以健康组培苗作为对照组,应用建立的 双重RT-PCR检测技术对采集于福建省不同产地的36份西番莲样品进行了病毒检测,发现有8份样品同时感染两种病 毒,8份样品仅感染TeMV,10份样品仅感染CMV。本研究可为西番莲TeMV和CMV的检测提供便利。