流式细胞仪测定荔枝倍性和基因组 大小的细胞核提取液筛选与应用

摘要：【目的】流式细胞术是目前测定植物倍性和基因组大小差异的最快、最有效的方法。建立适合荔枝的流式细胞 术的方法，对荔枝倍性育种以及基因组大小的确定是必不可少的。【方法】笔者以荔枝的幼嫩叶片为材料，筛选适合荔 枝的细胞核提取液配方，建立利用流式细胞仪测定荔枝倍性和基因组大小的方法。用改进的标准两步法，比较了6种 常用细胞核提取液提取细胞核的效果。【结果】利用WPB（Woody Plant Buffer）提取的大部分荔枝品种（品系）叶片细胞 核稳定、分辨率高、细胞碎片少且细胞G0/G1峰的变异系数（CV）较低，平均CV值为5.12%，说明该配方适用于酚类物质 丰富的荔枝细胞核的提取。同时以已知染色体数量的‘无核荔’（2n=30）为外标，检测了18个品种（品系）的倍性，发现 参测样品的G0/G1峰与‘无核荔’G0/G1峰的荧光均值的比值为0.78～1.24，说明所测荔枝品种（品系）均为二倍体。以已 知基因组大小的‘Stupické polní rané’番茄为内标测定了14个品种（品系）的基因组大小，结果表明荔枝基因大小约为 550～620 Mb，平均602 Mb，不同荔枝品种（品系）间基因组大小存在一定差异。【结论】WPB细胞核提取液提取的荔枝 幼嫩的叶片的细胞核质量好，可用于流式细胞术荔枝倍性和基因组大小的测定，测定的结果显示参测荔枝品种（品系） 均为二倍体，无单倍或多倍的情况，不同荔枝品种基因组大小有一定的差异。