- 作者:潘振朋,侍 婷,SHAHID IQBAL,高志红
- 关键词:梅;石蜡切片;激光捕获显微切割;条带厚度;激光强度
- DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20200060
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摘要:【目的】建立一套利用激光捕获显微切割技术切取梅(Prunus mume Sieb. et Zucc.)的雌蕊并提取微量RNA的 技术体系。【方法】以梅品种‘大嵌蒂’和‘龙眼’的花芽和雌蕊为实验材料,制作石蜡切片,比较不同厚度条带的切割效 果并选取最佳的条带厚度制作切片;以Leica LMD 7 000激光捕获显微切割系统为实验核心,比较不同激光强度的切 割效果,选取切割效果最好的激光强度,分别切取2个梅品种的雌蕊,比较常温保存与液氮保存切割后样品所提取的 RNA质量,最终建立适合于梅的激光捕获显微切割提取微量RNA的最佳体系。【结果】在石蜡切片制作过程中,改进了试验材料的贮藏条件(在4℃冰箱低温贮藏),即除渗蜡和制片之外,其他如脱水、透明等步骤都在4 ℃冰箱中进行,而后再切片制片。经过反复比较,成功确定石蜡切片的最佳条带厚度为10 μm,激光捕获显微切割效果最好的激光强 度为30,并且明确切割后液氮保存的切割材料所提取RNA的RIN值比常温保存的高。【结论】改进了石蜡切片制作过 程中某些步骤中材料的贮藏温度,确定了适合于梅花芽的切片厚度以及显微切割激光强度,建立了相对简单、稳定且 重复性好的利用石蜡切片并联用激光捕获显微切割系统提取微量RNA的体系,为梅等木本植物开展微量RNA提取 及后续分子试验的研究提供了基础依据。