梅雌蕊激光捕获显微切割体系 及微量RNA提取方法的建立

摘要：【目的】建立一套利用激光捕获显微切割技术切取梅（Prunus mume Sieb. et Zucc.）的雌蕊并提取微量RNA的 技术体系。【方法】以梅品种‘大嵌蒂’和‘龙眼’的花芽和雌蕊为实验材料，制作石蜡切片，比较不同厚度条带的切割效 果并选取最佳的条带厚度制作切片；以Leica LMD 7 000激光捕获显微切割系统为实验核心，比较不同激光强度的切 割效果，选取切割效果最好的激光强度，分别切取2个梅品种的雌蕊，比较常温保存与液氮保存切割后样品所提取的 RNA质量，最终建立适合于梅的激光捕获显微切割提取微量RNA的最佳体系。【结果】在石蜡切片制作过程中，改进了试验材料的贮藏条件（在4℃冰箱低温贮藏），即除渗蜡和制片之外，其他如脱水、透明等步骤都在4 ℃冰箱中进行，而后再切片制片。经过反复比较，成功确定石蜡切片的最佳条带厚度为10 μm，激光捕获显微切割效果最好的激光强 度为30，并且明确切割后液氮保存的切割材料所提取RNA的RIN值比常温保存的高。【结论】改进了石蜡切片制作过 程中某些步骤中材料的贮藏温度，确定了适合于梅花芽的切片厚度以及显微切割激光强度，建立了相对简单、稳定且 重复性好的利用石蜡切片并联用激光捕获显微切割系统提取微量RNA的体系，为梅等木本植物开展微量RNA提取 及后续分子试验的研究提供了基础依据。