- 作者:徐小萍,廖琪,陈旭,陈晓慧,林玉玲,赖钟雄
- 关键词:龙眼;miR397;体细胞胚胎发生;靶基因;实时荧光定量PCR
- DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20180440
- 全文:
PDF () 摘要()
摘要:【目的】探讨龙眼 miR397 家族成员的分子特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】以‘红核子’龙 眼胚性愈伤组织为材料,通过对龙眼 miR397 前体序列二级结构分析、进化树构建、靶基因预测与裂解位点验证、以 及龙眼 miR397a 在龙眼体胚发育早期和不同激素浓度处理下的表达规律进行分析。【结果】龙眼 miR397 前体序列 5 端臂上可生成两个序列高度重合的成熟体序列 dlo-miR397a 和 dlo-miR397,二者仅有 5 端两个碱基 TC 之间的差异, 前体能形成稳定的茎环结构;进化树分析发现龙眼 miR397前体与桃、可可、脐橙等亲缘关系较近,处于同一分支,龙 眼 miR397 与拟南芥、甜橙、葡萄等亲缘关系较近,处于较为保守的同一分支,miR397 家族成员较前体序列在进化上 更为保守。靶基因预测表明龙眼 miR397 家族主要靶向调控漆酶基因家族和一条姐妹染色单体粘连蛋白(dlo_ 039206.1)。裂解位点验证发现靶基因姐妹染色单体粘连蛋白的裂解位点,但位于预测区间外。miR397a 在体胚发 生过程中对于靶基因姐妹染色单体粘连蛋白的调控模式在 0~3 d较为一致,均为下调表达,6~12 d为显著上调表达, 且二者呈典型的负调控关系。龙眼 miR397a在不同浓度 2,4-D 与 GA3激素处理下均出现下调表达趋势,而靶基因姐 妹染色单体粘连蛋白则在激素处理下的表达趋势并不明显,可能由于靶向裂解位点在预测区外所致。【结论】龙眼 miR397a 可能在龙眼体胚发生早期的 6~12 d,通过靶向调控姐妹染色单体粘连蛋白影响龙眼体胚发生早期形态建 成。龙眼 miR397 家族在进化上较为保守,其靶基因主要靶向调控龙眼漆酶家族和姐妹染色单体粘连蛋白。龙眼 miR397a 在不同浓度 2,4-D 与 GA3激素处理下均出现下调表达趋势,表明其在龙眼体胚发生早期可能通过激素信号 传导参与龙眼体胚发生早期形态建成。