龙眼miR397家族成员分子特性及其在体胚发生早期的表达分析

摘要：【目的】探讨龙眼 miR397 家族成员的分子特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】以‘红核子’龙 眼胚性愈伤组织为材料，通过对龙眼 miR397 前体序列二级结构分析、进化树构建、靶基因预测与裂解位点验证、以 及龙眼 miR397a 在龙眼体胚发育早期和不同激素浓度处理下的表达规律进行分析。【结果】龙眼 miR397 前体序列 5 端臂上可生成两个序列高度重合的成熟体序列 dlo-miR397a 和 dlo-miR397，二者仅有 5 端两个碱基 TC 之间的差异， 前体能形成稳定的茎环结构；进化树分析发现龙眼 miR397前体与桃、可可、脐橙等亲缘关系较近，处于同一分支，龙 眼 miR397 与拟南芥、甜橙、葡萄等亲缘关系较近，处于较为保守的同一分支，miR397 家族成员较前体序列在进化上 更为保守。靶基因预测表明龙眼 miR397 家族主要靶向调控漆酶基因家族和一条姐妹染色单体粘连蛋白（dlo_ 039206.1）。裂解位点验证发现靶基因姐妹染色单体粘连蛋白的裂解位点，但位于预测区间外。miR397a 在体胚发 生过程中对于靶基因姐妹染色单体粘连蛋白的调控模式在 0~3 d较为一致，均为下调表达，6~12 d为显著上调表达， 且二者呈典型的负调控关系。龙眼 miR397a在不同浓度 2,4-D 与 GA3激素处理下均出现下调表达趋势，而靶基因姐 妹染色单体粘连蛋白则在激素处理下的表达趋势并不明显，可能由于靶向裂解位点在预测区外所致。【结论】龙眼 miR397a 可能在龙眼体胚发生早期的 6~12 d，通过靶向调控姐妹染色单体粘连蛋白影响龙眼体胚发生早期形态建 成。龙眼 miR397 家族在进化上较为保守，其靶基因主要靶向调控龙眼漆酶家族和姐妹染色单体粘连蛋白。龙眼 miR397a 在不同浓度 2,4-D 与 GA3激素处理下均出现下调表达趋势，表明其在龙眼体胚发生早期可能通过激素信号 传导参与龙眼体胚发生早期形态建成。