龙眼胚性愈伤组织RNA结合蛋白LSm14的 基因克隆、亚细胞定位及表达分析

摘要：【目的】探究LSm14对龙眼体胚发生的影响，克隆RNA结合蛋白DlLSm14e基因并观察其亚细胞定位，分析其 表达特性。【方法】以龙眼胚性愈伤组织为材料，依据转录组数据和基因组数据，采用RT-PCR克隆了一个DlLSm14基 因，将其命名为DlLSm14e。对该基因进行生物信息学分析、亚细胞定位观察、龙眼非胚性愈伤组织和不同胚性培养物 以及不同激素处理下的 FPKM 值分析和不同浓度细胞分裂素（KT）处理下的 qRT-PCR 检测。【结果】该基因 CDS 全 长1 707 bp，编码568个氨基酸，该蛋白不含信号肽和跨膜结构，不属于分泌蛋白和跨膜蛋白；此外，该蛋白含有N端保 守结构域以及延长的C端，并且含有74个磷酸化修饰位点；系统发育分析表明，DlLSm14e蛋白与漾濞槭（Acer yangbiense)相似度较高，与单子叶植物亲缘关系最远；顺式作用元件分析表明，该基因含有大量光响应元件和多种激素响 应元件；亚细胞定位结果表明，该基因为核定位基因；表达谱与实时荧光定量分析显示，DlLSm14e的FPKM值在非胚 性愈伤组织（NEC）阶段最低，在球形胚阶段达到最高，推测DlLSm14e大量累积可能有利于龙眼体胚早期形态建成；不 同激素处理下，2,4-D抑制该基因表达，KT促进其表达，而KT的浓度能影响该基因的表达。【结论】龙眼LSm14e基因定 位于细胞核，该基因FPKM值随龙眼体胚胚性增加而升高，并且响应多种与龙眼体胚发生相关的激素，推测该基因可 能参与龙眼体胚早期的形态建成。