微毛樱桃NBS-LRR类抗病基因同源序列的克隆及进化分析

摘要：【目的】原产于贵州雷公山的微毛樱桃（Cerasus clarofolia）种质对根瘤病具有很强的抗性，探索其亮氨酸重复 核苷酸结合位点（nucleotide binding site-leucine rich repeat, NBS-LRR）抗病基因进化历程，为克隆樱桃根瘤病抗病基因 提供基础。【方法】利用同源序列法从微毛樱桃基因组DNA中克隆NBS-LRR类抗病基因的同源序列，对序列特征、进 化信息进行分析。【结果】共获得36条NBS-LRR，其中TIR类型24条、non-TIR类型12条。聚类结果显示，TIR与蔷薇 科李属 5 条欧洲甜樱桃（Prunus avium）、17 条桃（Prunus persica）、15 条果梅（Prunus mume）、1 条甘肃桃（Prunus kansuensis）的 NBS-LRR 序列聚在一支；non-TIR 与李属物种甜樱桃、桃、果梅以及蔷薇科非李属物种白梨（Pyrus bretscheideri）、月季（Rosa chinnensis）的 NBS-LRR 序列聚在一支。Ka/Ks 结果显示，微毛樱桃 non-TIR 类遭受正向选择， TIR类2个群组遭受纯化，1个群组遭受中性选择；TIR Ks频率远高于non-TIR，TIR Ks有两个分布范围，分别是0~0.3 和0.8~1.2，non-TIR Ks在0~0.3；TIR Ks在0.1~0.2分布频率最高，non-TIR在0~0.1分布频率最高。【结论】获得的微毛樱 桃NBS-LRR序列有TIR和non-TIR两种类型，系统进化树和Ks分析表明TIR可能更为古老，且微毛樱桃与桃、果梅的 进化距离小于微毛樱桃与欧洲甜樱桃，TIR比non-TIR有更大规模的复制，都发生在较近的时期；non-TIR遭受正向选 择，TIR遭受纯化和中性选择，TIR与non-TIR进化历程不同。