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柑橘衰退病毒RT-RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用

发布日期:2023/12/20 11:42:50 浏览次数:
作者:申世凯,曾婷,乔兴华,陈力,任杰群,周彦
关键词:柑橘;柑橘衰退病毒;反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条;快速检测
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20230275
全文: PDF 摘要全文阅读

摘要目的】柑橘衰退病由柑橘衰退病毒(citrustristezavirusCTV)引起,是一种世界性的重要柑橘病害。为实现CTV的田间快速检测,建立一种准确、快速且可视化的检测方法。【方法】以CTV外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,设计3对特异性引物和探针,通过引物筛选,以及优化引物浓度、反应时间和反应温度等条件,建立CTV的反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RT-RPA-LFD)快速检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品的检测。【结果】建立了CTVRT-RPA-LFD检测方法:最佳检测引物为RPA-1F/R,对应探针为RPA-P,最佳反应条件为40 ℃25 min,且与其他5种柑橘病毒无交叉反应。该方法的灵敏度是RT-PCR100倍,最低可检测到2.12×101拷贝·μL-1CTV核酸,与RT-qPCR相当。采用RT-RPA-LFD法在67份田间样品中检测出CTV阳性样品41份,与RT-PCR法检测结果一致。【结论】建立的CTVRT-RPA-LFD法具有操作简单、快速、结果可视等优点,适合基层植保工作者对田间样品开展快速检测。

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