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COP9亚基FaCSN5在草莓果实发育过程中的功能分析

发布日期:2023/12/20 11:22:49 浏览次数:
作者:高佳慧,冀桂明,李文静,郭家选,沈元月,高凡
关键词:草莓;红颜;CSN5;表达分析;亚细胞定位;激素诱导
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20230361
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摘要:【目的】探究草莓COP9信号复合体亚单位5constitutive photomorphogenic signalosome subunit5CSN5)在草莓果实发育过程中的功能。【方法】以草莓品种红颜为材料,根据草莓果实发育过程中的转录组数据,筛选并克隆FaCSN5基因。基于生物信息学对其功能域、理化性质、蛋白结构等进行预测。通过SDS-PAGEWesternBlot检测FaCSN5-His目的蛋白,利用烟草对其进行亚细胞定位分析。利用RT-qPCR检测FaCSN5的时空表达水平,利用农杆菌介导瞬时侵染草莓果实,观察记录表型,检测FaCSN5基因表达水平。利用圆片温育和外源激素处理试验检测外源激素对FaCSN5基因表达的诱导影响。【结果】系统进化树分析表明FaCSN5FvCSN5和月季CSN5b同源性较高,相似率分别为100%94.24%。克隆的FaCSN5与艳丽草莓8条基因序列的碱基和氨基酸序列相似率分别达98.97%99.35%FaCSN5基因的编码区为1080bp,编码359个氨基酸,具有一个保守的MPN结构域。pET30a-FaCSN5融合表达载体的大肠杆菌原核表达表明FaCSN5-His目的蛋白大小约66ku。亚细胞定位显示FaCSN5-GFP融合蛋白定位为细胞核和细胞质。FaCSN5在根中表达水平最高,在种子中最低,在根中的表达量是种子中表达量的8倍;果实发育过程中在全红期表达量最高,在褪绿期表达量最低,从褪绿期开始随着果实发育表达量升高。农杆菌介导瞬时侵染草莓果实,FaCSN5过表达能够促进草莓果实成熟;沉默FaCSN5表达则会抑制草莓果实成熟。FaCSN5启动子上含有响应茉莉酸甲酯和赤霉素的顺式作用元件,且其表达受到这两种激素及脱落酸的诱导。【结论】FaCSN5可能是通过多种激素调控促进草莓果实成熟。

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