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沙梨PpGAI3 基因的分离与原核表达分析

发布日期:2017/5/11 8:23:20 浏览次数:
作者:刘杭,王芳,李亮,王文婷,杨贺忠,马鑫瑞,吴少华,李永裕
关键词:沙梨;休眠;DELLA蛋白;PpGAI3;原核表达
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20160274
137-144
全文: PDF 摘要

摘要【目的】分离沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3,探究其蛋白在花芽休眠中的表达情况。【方法】从不同需冷量沙梨品种蜜雪梨黄花梨中分离PpGAI3 基因,重组到pEASY-Blunt E1表达载体中,转化BL21DE3)宿主菌后经IPTG诱导表达,并对表达菌株进行SDS-PAGEWestern blotting检测。【结果】获得2种沙梨的PpGAI3 基因,分别命名为PpGAI3mx PpGAI3hhGenBank登录号为KU954535KX078215,其开放阅读框(ORF)为1 641 bp,编码546个氨基酸,预测其为亲水性不稳定蛋白。进化树分析表明PpGAI3mx PpGAI3hh 与白梨的亲缘关系最近;成功构建了pEASY-Blunt E1-PpGAI3 原核表达载体,得到蛋白分子质量约60 ku的诱导表达产物。【结论】所得沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3 为植物DELLA蛋白家族中的成员,在梨花芽休眠过程中具有特异表达,且表达产物大部分以不溶性包涵体形式存在。