香蕉枯萎病菌4号生理小种β2-微管蛋白基因敲除与表型分析

PDF阅读 日期：2019/3/6 16:48:59 浏览： 次
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【目的】克隆并鉴定香蕉枯萎病菌 (Foc4) β2-微管蛋白 (β2-tub) 基因, 阐明β2-tub在多菌灵的抗药性及在病原菌致病过程中发挥的作用。【方法】采用PCR技术克隆了β2-tub的序列全长, 并对其进行生物信息学分析。应用Splitmarker同源重组技术获得Foc4的β2-tub基因敲除突变体, 并对其突变体的生物学表型、致病力及其对多菌灵的敏感性进行测定。【结果】生物信息学分析表明, Foc4β2-tub基因全长为1 694 bp, cDNA编码区全长1 347 bp, 由4个内含子和5个外显子组成, 编码蛋白含448个氨基酸。Foc4对多菌灵表现为敏感 (EC50=0.51μg·mL-1) , 与Foc4相比, β2-tub基因敲除突变体对多菌灵的敏感性 (EC50=0.36μg·mL-1) 表现显著增强, 差异显著 (p <0.05) 。与Foc4相比, β2-tub基因敲除突变体的生物学表型没有变化, 对巴西蕉苗的致病力明显减弱。【结论】β2-tub基因具有高度保守性, β2-tub基因敲除突变体对细胞壁选择性压力、氧化压力和渗透压力均没有影响, 但致病力下降, 同时β2-tub基因的变化会引起Foc4对多菌灵抗性的改变。