沙梨PpGAI3 基因的分离与原核表达分析

PDF阅读 日期：2017/5/11 8:23:20 浏览： 次
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【目的】分离沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3，探究其蛋白在花芽休眠中的表达情况。【方法】从不同需冷量沙梨品种‘蜜雪梨’和‘黄花梨’中分离PpGAI3 基因，重组到pEASY-Blunt E1表达载体中，转化BL21（DE3）宿主菌后经IPTG诱导表达，并对表达菌株进行SDS-PAGE和Western blotting检测。【结果】获得2种沙梨的PpGAI3 基因，分别命名为PpGAI3mx 和PpGAI3hh，GenBank登录号为KU954535和KX078215，其开放阅读框（ORF）为1 641 bp，编码546个氨基酸，预测其为亲水性不稳定蛋白。进化树分析表明PpGAI3mx 和PpGAI3hh 与白梨的亲缘关系最近；成功构建了pEASY-Blunt E1-PpGAI3 原核表达载体，得到蛋白分子质量约60 ku的诱导表达产物。【结论】所得沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3 为植物DELLA蛋白家族中的成员，在梨花芽休眠过程中具有特异表达，且表达产物大部分以不溶性包涵体形式存在。