【目的】鉴定山荆子抗腐烂病类受体激酶基因,为抗病分子育种提供参考。【方法】对MdCCR4的结构域组成、启动子区域的顺式作用元件(cis-elements)和进化关系进行了分析。结合苹果和梨果实瞬时表达和杜梨悬浮细胞稳定表达,分析了MdCCR4过表达前后各组织腐烂病抗性的差异。利用qRT-PCR分析了该基因过表达对免疫反应相关基因表达的影响。【结果】系统发育关系和结构域组成分析表明,MdCCR4为典型的CRINKLY4(CR4)家族成员,与苹果MD08G1217500的同源性最高,其在山荆子悬浮细胞中的表达显著受腐烂病信号诱导,最高上调至对照的456倍。与对照相比,MdCCR4的过表达显著降低了烟富3号苹果和黄冠梨接种腐烂病病菌(Vm和Vp)84 h后病斑的扩散率,病斑大小分别减少了25%和16.9%,即该基因瞬时表达可显著提高烟富3号苹果和黄冠梨果实的腐烂病抗性。将其转入杜梨-G03中并获得3个过表达细胞系。与野生型细胞系相比,过表达MdCCR4可显著增强悬浮细胞对腐烂病菌和腐烂病病菌代谢物的抗性。基因表达分析发现,过表达MdCCR4可显著诱导杜梨-G03细胞响应腐烂病信号过程中水杨酸、茉莉酸等免疫信号相关基因的表达。【结论】综上所述,CR4基因家族成员MdCCR4在腐烂病菌诱导下显著表达且过表达能够增强苹果和梨果实及杜梨悬浮细胞对腐烂病的抗性,水杨酸等多种免疫信号参与了其调控的免疫反应。本研究结果对于深入理解腐烂病抗性机制具有重要的学术价值。
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