【目的】为探究VdERD6L15在刺葡萄果实生长发育中的功能,本研究从‘湘刺1号’中克隆VdERD6L15基因及其启动子,进行了基因功能研究和启动子活性分析。【方法】本研究克隆了VdERD6L15基因CDS序列,并对CDS进行了生物信息学分析;构建了VdERD6L15表达载体,并通过瞬时转化烟草确定VdERD6L15基因编码蛋白的亚细胞定位;同时,通过在己糖缺陷型酵母菌株EBY.VW4000中异源表达VdERD6L15探究其功能;此外,通过启动子截短实验确定了VdERD6L15启动子的核心区域。【结果】本研究成功克隆刺葡萄VdERD6L15基因编码序列,该编码序列长1461 bp,可编码486个氨基酸,具有膜蛋白特征,属于单糖转运蛋白家族。亚细胞定位实验确认VdERD6L15蛋白主要定位于液泡膜上。通过在酵母菌株EBY.VW4000中进行异源表达,验证了VdERD6L15具有转运葡萄糖的能力。利用PlantCARE数据库对VdERD6L15启动子顺式作用元件进行分析,发现其主要包含光响应元件、干旱胁迫和激素响应元件。通过GUS染色分析,进一步确定候选基因VdERD6L15启动子的关键调控区域位于-500 bp到-1000 bp之间。【结论】VdERD6L15是一个定位在液泡膜上的糖转运蛋白,具有转运葡萄糖的功能;VdERD6L15启动子的核心元件位于ATG上游500 bp到1000 bp之间。
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