摘 要：【目的】建立‘小果甜柿’（Diospyroskaki Thunb.）叶片再生和优化其遗传转化体系，以期通过分子育种技术获得抗冻性强的砧木新种质。【方法】以‘小果甜柿’叶盘为外植体，首先通过不同生长素（IAA）浓度和细胞分裂素（ZT，TDZ）配比探讨对其愈伤诱导和不定芽再生的影响；进而探讨其叶片对不同抗生素浓度组合的敏感性；此外，利用上述根癌农杆菌介导的叶盘稳定遗传转化体系，进一步探讨超表达君迁子（Diospyros lotus L.）抗寒基因DlCBF1对‘小果甜柿’叶盘再生植物抗冻性的影响。【结果】叶圆片在MS（1/2N）+ ZT 2.0 mg/L+ TDZ 2.0 mg/L培养基中愈伤形成率最高（64.71%）；将愈伤组织接种到MS（1/2N）+ ZT 2.0 mg/L+ IAA 0.1mg/L生芽培养基中不定芽再生率和不定芽数分别为31.11%和2.37±0.11个。头孢霉素浓度为400 mg/L时可抑制农杆菌生长，且叶片愈伤形成率低（9.84%）；卡那霉素对叶片再生影响大，该浓度为20 mg/L时其愈伤诱导率为11.57%。对‘小果甜柿’叶片稳定超表达君迁子DlCBF1基因，获得再生植株73株，其中阳性植株5株，荧光定量结果分析，阳性植株#1和#47 DlCBF1基因表达量分别为野生型的13倍和11倍。经过 -4℃低温处理8 h后，超表达株系于野生型株系相比，叶片受伤害程度更小，光合作用效率变化不明显，电导率含量低，H2O2和O2-在组织中的积累少，阳性株系表现出比野生型株系更强抗冻性。【结论】在优化‘小果甜柿’叶片外植体再生和稳定遗传转化体系的基础上，通过在‘小果甜柿’叶片中超表达君迁子DlCBF1基因，获得6.85%转基因阳性再生植株，稳定超表达DlCBF1基因可显著增强‘小果甜柿’再生植株的抗冻性。该研究为培育抗冻性强的柿砧木新种质提供了科学依据。
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