摘要：【目的】建立并优化苹果（Malusdomestica）幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系。【方法】以不同苗龄的平邑甜茶苹果幼苗为材料，使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599，通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法进行侵染苹果根颈部诱导毛状根，利用GFP荧光检测、GFP蛋白印迹检测、DNA检测和GUS染色方法进行转基因株系验证，同时对成功转化株系根、茎、叶组织的表达量分析检测发根农杆菌在转化苹果株系中的迁移性。【结果】不同苗龄苹果幼苗诱导毛状根能力具有较大差异，其中三叶龄幼苗诱导毛状根率最高为96%，五叶龄幼苗最高的毛状根诱导率为65%，以使用菌株涂抹方式转化植株其毛状根分布及毛状根诱导率为最佳。发根农杆菌在成功转化株系中存在随机向地上部迁移的现象，并能够整合目的基因至叶片叶柄及部分主叶脉基因组中，但在培养30d时无法通过蛋白印迹方式在蛋白水平上检测到蛋白信号。【结论】建立并优化了简单、高效的发根农杆菌介导的苹果转化体系，鉴定了发根农杆菌在转化株系中随机向地上部迁移规律，为发根农杆菌技术的进一步利用提供理论依据。
全文： 
PDF （ 下载次数：）