【目的】中国柚地方品种多但多数有种子,缺乏品质优良且无核的柚新品种。柑橘胞质雄性不育为母系遗传,以具有该性状的柚为母本与有核柚杂交,可将雄性不育胞质遗传至有性后代,有望在二倍体水平实现柚无核新品种选育。【方法】以利用细胞工程技术自主创制的雄性不育胞质杂种柚华柚2号为母本、地方特色有核柚为父本进行有性杂交,果实成熟期收集种子后,催芽播种培育杂交后代;在幼苗阶段依据多倍体形态特征从后代中筛选疑似多倍体并用流式细胞仪对其倍性进行鉴定;通过亲本重测序开发多态性InDel标记并对杂交后代遗传来源进行鉴定。【结果】以华柚2号为母本,贡水白柚、雷公柚、菊花芯柚、马家柚和甜柚1号为父本,配置5个杂交组合;人工授粉后共获得65个成熟果实,收集到1163粒种子,通过催芽播种共获得实生苗781株;依据多倍体形态特征,从华柚2号×甜柚1号杂交组合的110株后代中发掘出2株疑似多倍体,经流式细胞仪倍性鉴定其中1株为四倍体。用6对多态性InDel引物对从华柚2号×贡水白柚和华柚2号×雷公柚随机选取的各44株实生后代进行遗传鉴定,结果表明,其均有各自父本的特异条带,暗示2个杂交组合所有后代均为其相应双亲的有性后代。【结论】以雄性不育胞质杂种柚为母本创制的有性后代,为二倍体水平的柚无核新品种选育提供了宝贵的种质材料。