柑橘黄龙病菌分泌蛋白05150的筛选、 原核表达及抗血清制备

摘要：【目的】柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing，HLB）是柑橘产业的头号杀手，其病原主要是韧皮部杆菌属亚洲种 （Candidatus Liberibacter asiaticus，CLas），为革兰氏阴性菌，田间主要经亚洲柑橘木虱（Diaphorina citri）传播，为深入 研究该病菌分泌蛋白的功能，笔者筛选其中1个分泌蛋白，进行原核表达并制备抗体。【方法】设定4点条件从Prasad等预测的166个分泌蛋白基因中筛选，与pET-28a构建重组表达载体，以原核表达的融合蛋白作为抗原，用于注射兔子， 制备多克隆抗体。【结果】从预测的166个分泌蛋白基因中筛选出05150基因，成功构建表达载体pET-28a-05150，表达菌株pET-28a-05150在18 ℃、0.1 mmol·L^-1 IPTG浓度条件下诱导的目的蛋白为包涵体。获得的pET-28a-05150抗血清 通过ELISA效价为1∶4 000，通过dot ELISA检测手段可与田间感病样品发生显色反应，通过Western blot能与融合蛋 白杂交出特异性条带。【结论】该研究筛选了CLas的分泌蛋白基因05150，以其体外表达蛋白制备了pET-28a-05150抗血清，为研究05150基因功能奠定前期基础，也为建立HLB的血清学检测手段及探究柑橘黄龙病菌分泌蛋白基因的筛 选方法提供参考。