- 作者:刘彦英，倪珊珊，项蕾蕾，孙雪丽，陈裕坤，赖钟雄
- 关键词:香蕉；miR408b；Chemocyanin基因；低温胁迫；表达分析
- DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20190286
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摘要：【目的】研究香蕉中miR408b及其靶基因Chemocyanin在低温胁迫下的表达模式和调控机制。【方法】以三明野生蕉和‘天宝蕉’叶片为材料，利用RT-PCR和RACE技术克隆获得三明野生蕉中的MiChemocyanin基因（MiCHY）和‘天宝蕉’中的MaChemocyanin基因（MaCHY），利用在线网站对MiCHY进行生物信息学分析。【结果】MiCHY基因的cDNA全长为587 bp，开放阅读框381 bp，编码126个氨基酸蛋白，具有Plantacyanin结构域，属于超铜氧化还原蛋白家 族。在ORF区的4~24 bp处有一处高度匹配miR408b的结合区（GCTCAGGGAAGGGGCAGTGCG）。RLM-5’RACE 分析表明，miR408b主要在靶序列的第7~8个碱基之间剪切靶基因MiCHY的mRNA。序列比对发现，MaCHY基因比 MiCHY基因多了82 bp的序列，符合内含子的GT-AG剪切，推测发生了内含子驻留的可变剪接。保守结构域分析表明MaCHY没有Plantacyanin结构域，但也属于铜氧化还原蛋白家族。qRT-PCR结果表明，低温胁迫下，冷敏感的‘天宝蕉’miR408b的表达量上升，MaCHY的表达量降低；在抗寒的三明野生蕉中，miR408b的表达量下降，MiCHY表达量上 升，miR408b与MiCHY表达量呈负相关。【结论】miR408b及其靶基因MiCHY可能在香蕉响应低温胁迫中发挥重要作 用。