苹果叶片叶绿体分离及其蛋白提取、双向电泳方法的优化

摘要：【目的】筛选苹果叶片叶绿体及其蛋白的提取方法，建立叶绿体蛋白双向电泳分离技术体系。【方法】以苹果叶片为试材，采用4种Percoll密度梯度离心法提取苹果叶片叶绿体，检测提取叶绿体的完整度、纯度及提取率。采用酚抽提法、改良酚抽提法提取叶绿体蛋白，检测蛋白样品的质量。优化胶条长度、上样量、等电聚焦程序、分离胶浓度等双向电泳条件。【结果】Percoll密度梯度离心法D提取的叶绿体纯度高、提取率高，优于其他3种方法；改良酚抽提法提取的叶绿体蛋白，经2-DE分离所得蛋白点数多、分离效果好，优于酚抽提法。蛋白样品经优化后的双向电泳体系分离，获得了较为理想的2-DE图谱。【结论】Percoll密度梯度离心法D、改良酚提法适于苹果叶片叶绿体及其蛋白的提取。苹果叶片叶绿体蛋白使用优化后的双向电泳体系进行分离，可以获得比较理想的2-DE图谱。