苹果树腐烂病菌果胶裂解酶基因 Vmpl4 的致病功能研究

摘要：【目的】通过研究苹果树腐烂病菌果胶裂解酶（pectate lyase，PL）基因Vmpl4敲除突变体的致病力、对果胶的利用和基因敲除后家族内其他基因的表达水平变化，探明Vmpl4在致病过程中的作用。【方法】采用qRT-PCR技术检测Vmpl4在野生菌株03-8与寄主互作过程中的表达水平及Vmpl4敲除后PL家族内其他基因的表达水平，通过DoublejointPCR构建基因敲除载体，并通过PEG介导原生质体遗传转化获取转化子、PCR及Southern blot验证基因敲除突变体。利用苹果叶片和枝条离体接种方法检测突变体致病力；接种至PDA及果胶培养基，观察突变体的营养生长和对果胶的利用情况。【结果】Vmpl4在病菌侵染过程中上调表达高达10.20倍；通过验证得到1个基因敲除突变体，其在叶片和枝条上的致病力均显著降低，在果胶培养基上生长速率也明显降低，Vmpl4敲除后家族内4个基因在病菌侵染过程中表达水平显著上调。【结论】果胶裂解酶基因Vmpl4通过降解果胶参与致病过程，PL家族内其他基因与Vmpl4在病菌致病性方面共同发挥作用。